.RU

Замораживание и транспортировка спермы

Федеральное образовательное учреждение

Высшего профессионального образования

«Санкт-Петербургского» государственного аграрного университета

Калининградский филиал

Контрольная работа

По дисциплине: Акушерство и биотехника размножения сельскохозяйственных животных

На тему: «Замораживание и транспортировка спермы»

Выполнила: студентка V курса

зооинженерного факультета

заочной формы обучения

Пирожок Юлия Викторовна.

Полесск 2011


Замораживание и длительное хранение спермы быка

Широкое применение нашел метод замораживания и длительного хранения спермы быков в жидком азоте (-196°). Замороженную сперму можно доставлять в хозяйства 1—2 раза в год и использовать ее по мере надобности. Один раз в месяц сосуды, в которых содержится сперма, необходимо пополнять жидким азотом. На племпредприятиях (станциях) по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных сперму замораживают при помощи специального оборудования (приборов, аппаратов и т. д.) и хранят в стационарных емкостях, находящихся в хранилищах станций (филиалов). Отсюда ее отправляют в обслуживаемые хозяйства.

Для замораживания спермы на племпредприятиях (станциях) применяют следующие методы: Метод двухмоментного разбавления и трехступенчатого режима замораживания спермы быков при помощи специальных аппаратов (АХК-4, ПЗСС и др.). К замораживанию допускают сперму с подвижностью спермиев не ниже 8 баллов и их концентрацией не менее 0,8 млрд. в 1 мл. Затем сперму разбавляют глюкозо-цитратно-желточной средой (35—37°) двухмоментно: сначала без глиперина, а спустя 4 ч после охлаждения к разбавленной сперме путем подслаивания добавляют такую же среду, имеющую температуру плюс 2—5° и содержащую 16% глицерина. Сперму в глицеринизированной среде выдерживают в бытовом холодильнике 6—12 ч при температуре 2—5°. После эквилибрации (уравновешивания) проверяют подвижность спермиев (она должна быть не ниже 7 баллов), расфасовывают в стеклянные или полиэтиленовые ампулы по 1—1,2 мл. Ампулы запаивают и вкладывают в емкости, которые помещают в аппараты для замораживания. Замораживают сперму по трехступенчатому режиму со следующей скоростью: от 0 до 15° по 0,5° в 1 мин, от 15 до 50° по 2—3° в 1 мин и от 50 до 80° по 5—7° в 1 мин, после чего емкости (канистры) переносят в жидкий азот для хранения.

Метод одномоментного разбавления и быстрого замораживания спермы в форме гранул. В качестве разбавителей используют синтетические среды № 1 и №2. К разбавителям добавляют нетоксичный стрептомицин из расчета 1 г на 1000 мл жидкости. Свежеполученную сперму (после оценки) разбавляют средой № 1 в отношении 1:1, при этом концентрация глицерина в разбавленной сперме будет 3,5%; если качество спермы позволяет, ее дополнительно разбавляют средой № 2. При определении степени разбавления спермы для замораживания учитывают, что в одной грануле объемом 0,1 мл после оттаивания должно содержаться не менее 20—25 млн. подвижных спермиев. После разбавления сперму помещают в ванночку с водой, температура которой равна температуре спермы, и переносят на 30 мин в холодильник. При этом следят, чтобы сперма и вода охлаждались не быстрее 1° в минуту. Затем сперму при температуре 5° эквилибрируют в течение 5—6 ч. Для приготовления гранул берут блок сухого льда (двуокись углерода) и на его поверхности специальным нагревательным прибором (к электроутюгу прикрепляется пластина с выступами) делают лунки диаметром 5—7 мм. В каждую лунку 2-миллиметровым шприцем вносят по две капли спермы. Величина гранул должна быть 0,1 мл. После 5—10-минутной выдержки на поверхности сухого льда гранулы высыпают в сосуд (кружку) с жидким азотом. Гранулы со спермой разных быков высыпают в отдельные емкости. Сперму быков (замороженную) в гранулах можно расфасовывать в специальные трубочки из белой жести с продольным разрезом или в алюминиевые тубы, на которых записывают специальным карандашом кличку быка, дату получения спермы и название племпредприятия (станции). Кроме замораживания спермы на сухом льду, в настоящее время широкое применение нашел метод замораживания спермы в форме гранул в жидком азоте при помощи специальных пластин.

Замораживание спермы в гранулах в жидком азоте на фторопластовых пластинах. После получения и оценки сперму быков разбавляют лактозо-желточной средой с глицерином следующего состава: вода дистиллированная — 100 мл, лактоза — 11,5 г, желток куриных яиц —20 мл, глицерин —5 мл. Для предупреждения развития микрофлоры в сперме к среде добавляют препарат спермосан-3. Перед разбавлением среду подогревают до 30—35°. Этой средой сперму быков разбавляют в 2, 10 раз и более, в зависимости от объема гранул. Если применяют концентрированные гранулы спермы объемом по 0,1— 0,2 мл, то для них требуются меньшие степени разбавлении. Для замораживания спермы в гранулах объемом 0,5—1,0 мл сперму разбавляют в 10 раз и более. Такие гранулы перед осеменением коров не требуют дополнительного разбавления. Для замораживания сперму после разбавления охлаждают до температуры 2—4° в течение 4—5 ч, а затем разливают градуированными пипетками, шприцем или разливочной машиной в лунки (0,1—0,2 или 0,5 мл) охлажденной в жидком азоте фторопластовой пластины. Пластину со спермой выдерживают над поверхностью жидкого азота на расстоянии 5—10 см в течение 1,5—2 мин, а затем погружают ее в жидкий азот на 1—2 мин. После замораживания спермы пластину вынимают из жидкого азота, гранулы спермы собирают в сачок или контейнер, а затем пересыпают их в охлажденные чашки. На пунктах искусственного осеменения гранулы спермы хранят в сосудах Дьюара. Уровень азота в них должен быть значительно выше чашек с замороженной спермой в гранулах.

Метод замораживания спермы в облицованных гранулах. По этому методу для замораживания используют свежеполученную сперму, разбавленную средами следующего состава:

Среда № 1. 11%-ный раствор лактозы или сахарозы 63 мл

Желток куриных яиц 30 мл

Глицерин 7 мл

Среда № 2. Вода дистиллированная 100 мл

Лактоза или сахароза 6 г

Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный 1,4 г

Глицерин 5 мл

Приготовленные среды наливают в стерильные полиэтиленовые емкости по 200—400 мл, которые подсоединяют к специальному устройству для разбавления спермы. После получения спермы ее разбавляют средой № 1 в соотношении 1 : 1 и выдерживают при комнатной температуре 5—10 мин. Затем проводят дополнительное разбавление спермы средой № 2 до требуемой концентрации (20—25 млн. в дозе). Сперму разбавляют с помощью специального устройства, позволяющего дозирование вводить среды в отделенную часть одноразового полиэтиленового спермоприемника со спермой. Спермоприемник соединяют с тонкостенной полимерной трубкой и выдавливают в нее разбавленную сперму. Заполненную спермой трубку разделяют с помощью автомата АРС-2 на отдельные дозы по 0,33 мл с их герметизацией. Облицованные (герметизированные) гранулы помещают в алюминиевые контейнеры, которые закрывают пробками. Контейнеры закрепляют в обоймы специального устройства для эквилибрации и замораживания спермы. Это устройство помещают в холодильник для охлаждения до 2—5°. После 5—6-часовой выдержки при такой температуре обойму аппарата с контейнерами погружают в емкости с жидким азотом на 8—10 мин.

Замораживание спермы в соломинках (пайеттах). При замораживании используют полипропиленовые или поливинилхлоридные трубочки длиной 100 мм с внутренним диаметром 2,4 мм, одни конец которых предварительно закрывают специальным герметизирующим составом: парафин ГОСТ 13577—12,0, пентаэритритовый эфир канифоли — 44,8, тальк — 10,1, каучук натуральный — 1,5, глицерин ГОСТ 6259—71—8,0, краситель — 0,1. Сперму разбавляют трисбуферной средой, содержащей 6,056 г трисбуфера (трисгидрооксиметиланометан), 3,4 г лимонной кислоты, 2,5 г фруктозы, 166,3 мл бидистиллированной воды. Раствор делят на две равные части, к первой добавляют 15,8 мл бидистиллированной воды, 25 мл свежего яичного желтка, 100 тыс. ЕД антибиотиков, ко второй— 19,7 мл глицерина, желток и антибиотики в тех же количествах. Первый разбавитель добавляют к эякуляту, предварительно доведенному до температуры 25°. Вторую среду медленно добавляют к предварительно разбавленной сперме с таким расчетом, чтобы в соломинке (пайетте) содержалось 20—25 млн. подвижных спермиев. После разбавления сперму расфасовывают по 0,4 мл в стерильных условиях вакуумным способом. Для этого необходимое количество промаркированных соломинок (от 100 до 500 шт. в зависимости от количества спермы) ставят открытыми концами вниз в стеклянную плоскодонную посуду со спермой помещают в анаэростат, из которого насосом вначале откачивают воздух до давления 0,95 атм., а затем впускают его. Воздух нагнетает сперму в соломинку. Заполненные спермой пайетты зажимают в специальном держателе, при температуре 25° погружают в герметизирующий состав и закрывают второй конец. После герметизации соломинки помещают на медное сито (корзинку) и переносят в пары жидкого азота стационарного хранилища. Корзинку с соломинками опускают в хранилище до соприкосновения с поверхностью азота. Вскипание азота образует ток холодного газа, который охлаждает и замораживает сперму до 100—130° в течение 5 мин. Соломинки с замороженной спермой переносят в стаканчики, помещают в канистры и закладывают в хранилище с жидким азотом. Замороженную в соломинках сперму перед использованием оттаивают в стерильном полиэтиленовом мешочке, помещенном в теплую воду (38—40°) в течение 12—14 с. Независимо от метода замораживания сперму оттаивают и проверяют на подвижность спермиев сразу после замораживания, второй раз — через сутки, третий — через 7—10 дней и четвертый раз — через 14—20 дней. Замороженная сперма для дальнейшего хранения допускается при подвижности спермиев не ниже 4 баллов. Для оценки оттаянной спермы в пайеттах (выборочно) производят смешивание ее из одной соломинки с равным количеством изотонического раствора лимоннокислого или бикарбоната натрия. Для этого один конец соломинки обрезают ножницами и опускают в раствор, а затем этими же ножницами обрезают и второй ее конец. Полученную смесь спермы и раствора перемешивают соломинкой и с ее помощью берут каплю для оценки. Для осеменения используют сперму не раньше 14—20 дней после замораживания. Оттаявшую сперму вновь замораживать нельзя.


zhizn-i-tvorchestvo-ukrainskogo-pisatelya-vk-vinnichenko-chast-3.html
zhizn-i-tvorchestvo-ukrainskogo-pisatelya-vk-vinnichenko-chast-8.html
zhizn-i-tvorchestvo-vasiliya-ivanovicha-surikova.html
zhizn-idet-otec-arsenij.html
zhizn-radi-smerti.html
zhizn-studencheskaya-1-kurs-chudo-v-reshete.html
  • vospitanie.bystrickaya.ru/zagadka-formirovaniya-proizvolnogo-povedeniya-uchebnoe-posobie-dlya-vuzov-izdanie-vtoroe-rekomendovano-redakcionno-izdatelskim.html
  • school.bystrickaya.ru/kratkaya-hronologicheskaya-tablica-po-istorii-razvitiya-znanij-o-zemle-stranica-3.html
  • reading.bystrickaya.ru/laboratornaya-rabota-3-uchebno-metodicheskij-kompleks-po-discipline-primenenie-integrirovannih-paketov-v-inzhenernih.html
  • assessments.bystrickaya.ru/buhgalter-dlya-predprinimatelya-reshenie-zadach-47-poisk-informacii-v-seti-internet-49.html
  • exchangerate.bystrickaya.ru/idejnie-istoki-politicheskoj-nauki.html
  • otsenki.bystrickaya.ru/socialnoe-partnerstvo-publichnij-do-samoobsledovanie-gosudarstvennogo-obrazovatelnogo-uchrezhdeniya-srednego-professionalnogo.html
  • zanyatie.bystrickaya.ru/raspredelenie-vipusknikov-obrazovatelnih-uchrezhdenij-goroda-cheboksari.html
  • shpargalka.bystrickaya.ru/verhovnij-sud-rossijskoj-federacii-opredelenie-ot-29-marta-2007-g-n-kas07-49.html
  • laboratory.bystrickaya.ru/vedushij-redaktor-redaktor-razdela-rubriki-rukovodstvo-izdatelskogo-doma-5.html
  • obrazovanie.bystrickaya.ru/pp-polnoe-naimenovanie-yuridicheskogo-lica-stranica-92.html
  • shpora.bystrickaya.ru/zakoni-garmonii-kosmosa.html
  • exchangerate.bystrickaya.ru/ii-osnovnaya-informaciya-o-finansovo-ekonomicheskom-sostoyanii-emitenta-654043-rossiya-kemerovskaya-oblast-gorod.html
  • lesson.bystrickaya.ru/o-promisle-svyatitel-grigorij-bogoslov-pesnopeniya-tainstvennie-chast-1-2000.html
  • holiday.bystrickaya.ru/moej-mame-klavdii-vasilevne-elcinoj-posvyashayu-etu-knigu-stranica-11.html
  • desk.bystrickaya.ru/polozhenie-o-gumanitarnih-osnovaniyah-statya-15-28-5-predostavlenie-informacii-29-stranica-9.html
  • paragraf.bystrickaya.ru/vvedenie-625049-rossiya-g-tyumen-moskovskij-trakt-143-korp-4-of-2-informaciya-soderzhashayasya-v-nastoyashem-ezhekvartalnom.html
  • write.bystrickaya.ru/glava-3-regionalnie-patentnie-sistemi-vitaliev-g-v-denisov-g-m-intellektualnaya-sobstvennost-zakonodatelstvo.html
  • lecture.bystrickaya.ru/avtoreferat-dissertacii-na-soiskanie-uchenoj-stepeni-doktora-istoricheskih-nauk-stranica-3.html
  • universitet.bystrickaya.ru/u-pravlenie-zags-i-arhivov-lipeckoj-oblasti-ogu-gosudarstvennij-arhiv-lipeckoj-oblasti-gosudarstvennij-arhiv-lipeckoj-oblasti-putevoditel-lipeck-2008.html
  • kolledzh.bystrickaya.ru/analiz-i-ocenka-processa-upravleniya-denezhnimi-potokami-predpriyatiya-ooo-kondi-chast-7.html
  • knowledge.bystrickaya.ru/nalogovaya-sistema-nepa.html
  • writing.bystrickaya.ru/hudozhnik-v-bondar-perumov-n-d-p-26-vojna-maga-tom-konec-igri-chast-pervaya-cikl-hranitel-mechej-kniga-4-nik-perumov-stranica-11.html
  • uchenik.bystrickaya.ru/8-drugie-normativno-metodicheskie-dokumenti-i-materiali-obespechivayushie-kachestvo-podgotovki-obuchayushihsya.html
  • student.bystrickaya.ru/13-magiya-slova-v-rusle-vsederzhitelnosti-ti-luchshih-budushih-vremyon-glagol-i-zhizn-i-prosveshene-f.html
  • spur.bystrickaya.ru/lekciya-1-vvodnaya.html
  • universitet.bystrickaya.ru/svyatootecheskij-podhod-k-sektantstvu-eresi-stranica-6.html
  • knowledge.bystrickaya.ru/misl-misleobrazi-idei-elementali-lyarvi-empuzi-prostranstvennaya-misl-mir-mislej-vladiki-prostranstvennij-prikaz-misl-misleobrazi-stranica-8.html
  • exchangerate.bystrickaya.ru/allergicheskaya-reakciya.html
  • esse.bystrickaya.ru/raspisanie-zanyatij-na-fakultete-ekonomiki-i-investicij-zaochnoe-otdelenie-kurs-3-srok-obucheniya-3-goda-3-s-20.html
  • thesis.bystrickaya.ru/pri-otkritii-programmi-predlagaetsya-vibor-razdelov-rekomendacii-i-testovij-kontrol-referati-otveti-na-ekzamenacionnie-voprosi-prezentacii-razdel.html
  • znaniya.bystrickaya.ru/programma-vstupitelnogo-ispitaniya-sobesedovanie-v-magistraturu-po-napravleniyu-220400-68-upravlenie-v-tehnicheskih-sistemah-magisterskaya-programma-roboti-i-robototehnicheskie-sistemi.html
  • occupation.bystrickaya.ru/o-sostoyanii-mestnogo-samoupravleniya-v-rossijskoj-federacii-i-zadachah-vsms-na-predstoyashij-period.html
  • ucheba.bystrickaya.ru/prakticheskaya-rabota-n12-6-sistema-vozdushnih-signalov-svs-72-3-stranica-5.html
  • desk.bystrickaya.ru/pasport-bezopasnosti-territorii-ahov-avarijno-himicheski-opasnoe-veshestvo-v-v-vzrivchatie.html
  • gramota.bystrickaya.ru/zakon-orlovskoj-oblasti.html
  • © bystrickaya.ru
    Мобильный рефератник - для мобильных людей.